水质五日生化需氧量新标准的方法验证

水质五日生化需氧量新标准的方法验证, 

由于水质生化需氧量的方法进行了修订，我们实验室进行了新方法的开发实验。
对比了两个标准，我发现了以后做实验有几个要注意的地方：
1.明确规定了方法检出限，以后的原始记录上就要填写方法检出限一栏，以前我们填的都是测定的最小值（2mg/L)；
2.培养时间和温度有两种选择：（20±1）℃的暗处培养5d 或：（2+5）d±4h。我们沿用第一种培养方法，所以此项内容不做改动；
3.盐溶液的保存时间和保存条件已经明确给出，应按规定保存；
4.稀释水应先曝气1h，后加盐溶液在20℃保存，且为避免溶解氧过饱和，使用前应开口放置1h；
5.样品采集时用密封棕色玻璃瓶，我们以前用的是透明的玻璃瓶，需改正；
6.样品前处理增加的部分比较多：样品应均质化；有藻类是应按规定用1.6μm滤膜过滤；含盐量低时加入适量相同体积的四种盐溶液使其电导率大于125μs/㎝；这些步骤都要在作业指导书中相应增加；
7.样品恒温至20℃左右，若其溶解氧含量低则用曝气装置曝气15min。此步骤为新增内容；
8.关于稀释倍数的确定，依据增为三个：总有机碳、高锰酸盐指数和化学需氧量。实验室要合理使用。
一下是为新标准二进行的方法开发实验验证报告：

摘要：本文通过对稀释与接种法测定五日生化需氧量的新标准进行了一系列的验证分析，并利用数理统计方法，计算出方法的最低检出限为0.15mg/L，精密度为5.6mg/L。经统计学检验，以上各项指标均符合规范的要求。
关键词：稀释与接种法 生化需氧量 方法验证

一、方法原理
水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD₅形式表示，结果即为五日生化需氧量。

二、仪器与试剂
1．仪器
1.1 LI20-2型恒温培养箱
1.2 Orion 862A型溶解氧测定仪
1.3 300ml带水封装置的溶解氧瓶
1.4 1000ml量筒
1.5 曝气装置
1.6 虹吸管
1.7 10L玻璃瓶
2．试剂
2.1 纯水
2.2 盐溶液
下述溶液在0-4℃可稳定保存6个月。一旦发现有生物滋长迹象，则应弃去不用。
2.2.1 磷酸盐缓冲溶液：将4.25g磷酸二氢钾（KH₂PO₄）、10.88g磷酸氢二钾（K₂HPO₄)、22.3g十二水磷酸氢二钠（Na₂HPO₄•12H₂O)和0.85g氯化铵（NH₄Cl）溶于水中，稀释500ml并混合均匀。此缓冲溶液的pH应为7.2。
2.2.2硫酸镁溶液，ρ（MgSO₄)=11.0g/L：将11.25g七水硫酸镁（MgSO₄•7H₂O)溶于水中，稀释至500ml并混合均匀。
2.2.3 氯化钙溶液，ρ（CaCl₂)=27.6g/L：将13.8g无水氯化钙（CaCl₂)溶于水，稀释至500ml并混合均匀。
2.2.4氯化铁溶液，ρ（FeCl₃）=0.25g/L：将0.25g六水氯化铁（FeCl₃•6H₂O）溶解于水中，稀释至1000ml并混合均匀。
2.3 稀释水
在10L玻璃瓶中，加入一定量的水（本次实验为8L），于（20±1）℃培养箱中曝气1.5h，使稀释水中的溶解氧达到8mg/L以上。使用前每升水中加入以上四种盐溶液各1.0ml，混匀，20℃保存。使用前开口放置1h，并在24h内使用。
2.4 葡萄糖–谷氨酸标准溶液
将一葡萄糖（C₆H₁₂O₆，优级纯）和谷氨酸（HOOC–CH₂–CH₂–CHNH₂–COOH，优级纯）在130℃下干燥1h，各称取150±1mg，溶于纯水中，稀释至1000ml并混合均匀。此溶液于临用前配制。

三、简要操作步骤（稀释法）
1. 试验水样的准备
将试验样品放入培养箱使其温度升至约20℃，用虹吸法吸取适量水样（水样稀释倍数依据总有机碳、高锰酸盐指数和COD值及标准的建议确定）置于1000ml量筒中，用稀释水稀释至1000ml，轻轻地用搅拌棒混合均匀，避免夹杂空气泡。
同时用稀释水进行平行空白实验测定。
2. 测定
按采用的稀释比配制得到试验水样，用虹吸管充满两个培养瓶至稍溢出。将所有附着在瓶壁上的空气泡赶掉，盖上瓶盖，小心避免夹杂空气泡。
将瓶子分为两组，每组都含有一瓶选定稀释比的稀释水样和空白溶液。测量一组的稀释水样和空白溶液的溶解氧浓度，同时放另一组于培养箱中，在（20±1）℃下暗中放置5天。
培养5天后，测定放在培养箱中的稀释水样和空白溶液的溶解氧浓度。
3. 验证试验
取20ml葡萄糖–谷氨酸标准溶液用稀释水稀释至1000ml，并且按照样品测定的步骤进行测定。测得的BOD₅应在180-230mg/L之间。本试验同试验样品同时进行。

四、分析方法验证程序
1．最低检出限—全程序空白值实验
1.1每天测1对空白样，共测5天。
1.2空白实验、最低检出限统计及空白值检验。（见表一）
表一 空白实验及最低检出限统计

2．方法精密度实验（见表二）

表二 精密度实验

五、评价与验证结论
1．评价
（1）空白值最低检出限评价
本方法的最低检出限为0.5mg/L，本实验的最低检出限为0.15mg/L,符合方法要求。
（2）精密度评价
本方法的结果重现性标准偏差为11mg/L，本次试验测得的重现性标准偏差为5.6mg/L，符合要求。
2．结论
通过对上述各项指标的验证，表明该项目可在本公司开展。

参考文献
1．HJ505-2009 《水质 五日生化需氧量（BOD₅）的测定 稀释与接种法》环境保护部 2009
2．深圳市***检测有限公司《水和废水分析方法验证规程》 2008